Cel: małe pęcherzyki zewnątrzkomórkowe (sEVs) to nanoskalarne struktury o charakterze biomateriałów, uczestniczące w komunikacji międzykomórkowej oraz progresji nowotworów. Zaburzona glikozylacja powierzchni może stanowić potencjalny marker diagnostyczny nowotworów złośliwych. Celem badania było porównanie rozmiaru, glikozylacji oraz właściwości biofizycznych sEVs wydzielanych przez pierwotne i przerzutowe komórki czerniaka, a także ocena nowej techniki analitycznej do profilowania glikanów.
Metody: sEVs izolowano z linii komórkowych czerniaka: pierwotnej (WM115) oraz przerzutowej (WM266-4). Ich rozmiar i stężenie oceniano metodą analizy śledzenia nanocząstek, natomiast markery egzosomalne potwierdzano metodą Western blot. Profilowanie glikozylacji wykonano przy użyciu podejścia multimodalnego: mikrowagi kwarcowej z monitoringiem dyssypacji (QCM-D), zlokalizowanego rezonansu plazmonów powierzchniowych (NPS) oraz — po raz pierwszy — analizy dyspersji indukowanej przepływem (FIDA).W analizach FIDA lektyna Con A znakowana fluorescencyjnie pełniła rolę indykatora, natomiast w pomiarach NPS i QCM-D stosowano nieznakowaną Con A jako cząsteczkę wiążącą struktury mannozowe badanych próbek.
Wyniki: sEVs pochodzące z linii WM266-4 (przerzutowej) były istotnie większe, natomiast komórki WM115 wydzielały większą liczbę pęcherzyków. Metody QCM-D i NPS wykazały silniejsze wiązanie Con A oraz wyższy indeks lepkosprężystości glikanów w sEVs pochodzących z komórek przerzutowych, co wskazuje na zmienioną architekturę glikanów powierzchniowych. Analiza FIDA dodatkowo potwierdziła te różnice, wykazując niższą stałą dysocjacji (Kd) oraz multiwalencyjny charakter wiązania w sEVs WM266-4, co jest zgodne z bardziej gęstą „otoczką” glikanową.
Wniosek: sEV pochodzące z przerzutowego czerniaka wykazują odmienny profil glikozylacji, wykrywalny z użyciem Con A, który może być związany ze złośliwym fenotypem nowotworu. Badanie pokazuje przydatność multimodalnych metod biofizycznych, w szczególności FIDA, jako czułych narzędzi do profilowania glikanów pęcherzyków zewnątrzkomórkowych. Choć wyniki dotyczą sEVs pochodzących z linii komórkowych, wspierają one potencjał translacyjny sygnatur glikanowych w przyszłych platformach biopsji płynnej oraz rozszerzają możliwości analityczne nanodiagnostyki nowotworów.