Mikromacierze białkowe SPRi to nowoczesne narzędzia do szybkiej i bezznacznikowej immunodetekcji, które umożliwiają wysokoprzepustową biodetekcję oraz analizę interakcji molekularnych. Jednak ich rutynowe zastosowanie w analizie ilościowej wymaga odpowiedniej powtarzalności i jednorodności warstw receptorowych wytwarzanych ex-situ za pomocą technik mikronanoszenia. Istotnym wyzwaniem jest  również opracowanie wszechstronnych i nieniszczących metod określania gęstości powierzchniowej białek, aby lepiej kontrolować proces ich immobilizacji.

W niniejszej pracy przedstawiamy prostą, jednoetapową metodę wizualizacji białek powierzchniowych poprzez ich odwracalne, niespecyficzne znakowanie anionowymi barwnikami: Ponceau S, czernią amidową 10B lub błękitem brylantowym Coomassie. Wykorzystując przeciwciało IgG królika oraz transferynę jako modelowe receptory, wykazaliśmy możliwość określenia gęstości powierzchniowej białek w szerokim zakresie – do ok. 3 ng∙mm⁻² (dla dwuwymiarowej monowarstwy typu SAM) oraz do co najmniej 12,5 ng∙mm⁻² (dla trójwymiarowej monowarstwy na szkielecie hydrożelowym).

 Zakresy dynamicznej odpowiedzi opracowanych metod obejmują typowe gęstości powierzchniowe receptorów stosowane w konstrukcji biosensorów SPR oraz badaniach kinetyki oddziaływań białek. Badania wykazały, że każdy z analizowanych barwników ma swoje unikalne zalety w zależności od zastosowania. Błękit Coomassie wyróżnia się najwyższą czułością w odpowiedzi SPRi, czerń amidowa pozwala na efektywne znakowanie w najłagodniejszych warunkach, a Ponceau S charakteryzuje się najszybszą asocjacją i odmywaniem, nawet z warstw o wysokiej gęstości powierzchniowej białek.

Potwierdzono również skuteczność opracowanej metody w kontroli jakości mikromacierzy SPRi. W naszej pracy opisano także liczne zalety nowej, opartej na barwnikach metody niespecyficznego znakowania w porównaniu z typowo wykorzystywanym do tego celu immunoznakowaniem, szczególnie pod względem prostoty realizacji i uniwersalności.